Описание
Урацил-ДНК-гликозилаза (УДГ) – фермент, катализирует высвобождение урацила из урацил-содержащих одно- или двуцепочечной ДНК, но не действует на dTTP.
Образующийся абазический сайт блокирует работу ДНК-полимераз и подвергается гидролитическому расщеплению при повышенной температуре и высоких значениях pH. Сам фермент также чувствителен к нагреванию и может быть инактивирован при температуре выше 70°С.
Урацил-ДНК-гликозилаза может быть использована в системе борьбы с контаминацией реакционной ПЦР-смеси продуктами ранее выполненных ПЦР (в первую очередь, при использовании электрофоретической детекции, либо многостадийной ПЦР), что приведет к появлению ложноположительных результатов.
Алгоритм использования:
1) Частичная или полная замена в реакционных ПЦР-смесях dTTP на dUTP, → все получающиеся ампликоны содержат урациловые основания;
2) УДГ выщепляет урацил из ампликонов, попавших из предыдущих амплификаций;
3) Все ампликоны, попавшие в реакционную смесь из предыдущих амплификаций содержат урацил → перестают быть матрицами для ДНК-полимераз
Характеристики фермента:
- молекулярная масса 24,6KDa;
- не требует катализатора
- совместим с подавляющим большинством ПЦР-буферов
- активен в широком диапазоне температур: от 20 до 50°С, оптимум 37°С
Характеристики
При температуре от -18 до -30 °С
