Урацил-ДНК-гликозилаза
Урацил-ДНК-гликозилаза
Урацил-ДНК-гликозилаза (УДГ) – фермент, катализирует высвобождение урацила из урацил-содержащих одно- или двуцепочечной ДНК, но не действует на dUTP. Образующийся при этом абазический сайт блокирует работу ДНК-полимераз и весьма подвержен гидролитическому расщеплению при повышенной температуре и высоких значениях pH. Сам фермент также чувствителен к нагреванию и может быть инактивирован при температуре выше 70°С.
Риск ложноположительных результатов ПЦР является одной из проблем лабораторий, использующих этот метод в исследовательских и диагностических целях. Причиной этих результатов может стать контаминация реакционной ПЦР-смеси продуктами ранее выполненных ПЦР. Один из способов борьбы с такой контаминацией состоит из трех этапов:
- Частичная или полная замена в реакционных ПЦР-смесях dTTP на dUTP, которая приводит к тому, что все получающиеся ампликоны содержат урациловые основания;
- Введение в реакционную смесь УДГ и добавление к протоколу этапа предобработки, например, 5 минут при 50°С.
- Введение в протокол амплификации этапа температурной инактивация фермента, в результате которой происходит также гидролитическое разрушение ампликонов с выщепленным урацилом, например, 3 минуты при 95°С.
В результате внесения перечисленных этапов в протокол эксперимента все ампликоны с урацилом, попавшие в реакционную смесь из предыдущих амплификаций, перестают быть матрицами для ДНК-полимераз
Характеристики фермента:
- молекулярная масса 24,6KDa;
- не требует катализатора
- совместим с подавляющим большинством ПЦР-буферов
- активен в широком диапазоне температур: от 20 до 50°С, оптимум 37°С
Со смесями dNTP для систем с УДГ можно ознакомиться по ссылке.
Перейдите по ссылке, чтобы узнать стоимость ферментов.
Дополнительную информацию о спектре предоставляемых услуг можно получить по телефону: +7-812-677-65-35 или отправить вопрос по электронному адресу forpcr@alkorbio.ru
Товар не предназначен для медицинских целей на территории РФ.